Мутационный и кинетический анализ эндорибонуклеазной активности APE1

Мутационный и кинетический анализ эндорибонуклеазной активности APE1 Full article

Journal

Молекулярная биология
ISSN: 0026-8984

Output data

Year: 2021, Volume: 55, Number: 2, Pages: 243-257 Pages count : 15

Authors

Кузнецова А.А. ¹ , Гаврилова А.А. ^1,2 , Новопашина Д.С. ¹ , Федорова О.С. ¹ , Кузнецов Н.А. ¹

Affiliations

1	Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН
2	Новосибирский государственный университет

Апуриновая/апиримдиновая эндонуклеаза 1 человека (APE1) крайне важна для нормального функционирования организма, так как участвует в системе репарации ДНК. Основной биологической функцией APE1 считается Mg2+-зависимый гидролиз АР-сайтов в ДНК. На основе структурных данных, кинетических исследований и мутационного анализа в настоящее время установлены ключевые этапы взаимодействия APE1 с поврежденной ДНК. Недавно показано, что APE1 выступает в качестве эндорибонуклеазы, которая может катализировать гидролиз мРНК по некоторым пиримидин-пуриновым сайтам и тем самым контролировать уровень определенных транскриптов. Известно, что для реализации эндорибонуклеазной активности APE1 не требуется присутствия ионов Mg2+, как в случае АР-эндонуклеазной активности, что свидетельствует о различиях в механизмах катализа в случаях РНК- и ДНК-субстратов, однако причины этих различий пока до конца не выяснены. Нами исследован эндорибонуклеазный гидролиз модельных РНК-субстратов ферментом APE1 дикого типа и мутантными формами, содержащими замены аминокислотных остатков активного центра: Y171F, R177F, R181A, D210N, N212A, T268D, M270A и D308A. Показано, что замена остатков Asn212, Asp210 и Tyr171 приводит к потере только АР-эндонуклеазной активности с сохранением эндорибонуклеазной, T268D и M270A ‒ к потере специфичности фермента к пиримидин-пуриновым последовательностям, Arg177 и Arg181 незначительно влияет на активность АРЕ1, в то время как D308A приводит к снижению эндорибонуклеазной активности фермента.

Кузнецова А.А. , Гаврилова А.А. , Новопашина Д.С. , Федорова О.С. , Кузнецов Н.А.
Мутационный и кинетический анализ эндорибонуклеазной активности APE1
Молекулярная биология. 2021. Т.55. №2. С.243-257. РИНЦ

Kuznetsova A.A. , Gavrilova A.A. , Novopashina D.S. , Fedorova O.S. , Kuznetsov N.A.
Mutational and Kinetic Analysis of APE1 Endoribonuclease Activity
Molekuliarnaia biologiia. 2021. V.55. N2. P.243-257. DOI: 10.31857/S0026898421020099 WOS Scopus РИНЦ OpenAlex

Submitted:

Sep 14, 2020

Elibrary:

44675039

DB	Citing
Elibrary	3