Способ определения активности ферментов эксцизионной репарации оснований ДНК в клетках человека
Patents
| Language: |
Русский |
| Type: |
Invention |
| Number |
RU 2789867 |
| Request number: |
2022109065 |
| Request date: |
Apr 5, 2022 |
| patent.field.start_date: |
Apr 5, 2022 |
| Registration date: |
Feb 14, 2023 |
| patent.field.request_publication_date: |
|
| Authors |
Алексеева Ирина Владимировна
,
Кузнецова Александра Александровна
,
Кладова Ольга Алексеевна
,
Шендер Виктория Олеговна
,
Шнайдер Полина Владимировна
,
Федорова Ольга Семеновна
,
Кузнецов Никита Александрович
|
| Affiliations |
| 1 |
Федеральное государственное бюджетное
учреждение науки Институт химической
биологии и фундаментальной медицины
Сибирского отделения Российской академии
наук (ИХБФМ СО РАН) (RU)
|
|
Изобретение относится к области биохимии.
Описан способ определения активностифермента
эксцизионной репарации оснований ДНК группы:
АРЕ1, UNG2, SMUG1, MBD4, TDG, AAG, NEIL1,
NTHL1 или OGG1 - в клетках человека. Он
включает смешивание субстрата, буфера и
клеточного экстракта в соотношении 1:1 и
регистрацию изменения интенсивности
флуоресценции субстрата с помощью
флуориметра с последующей обработкой
полученных кинетических кривых с помощью
программы. Способ отличается тем, что в
качестве субстрата используют ДНК-зонды: 5-
F AM-GCTC A(F)
GTACAGAGCTGTTTTTCAGCTCTGTACGTGAGCpsBHQ1-3, 5-FAM-GCTC A(U)
GTACAGAGCTGTTTTTCAGCTCTGTACGTGAGCpsBHQ1-3, 5-FAM-GCTCA(εA)
GTACAGAGCTGTTTTTCAGCTCTGTACGTGAGCpsBHQ1-3, 5-FAM-GCTCA(Tg)
GTACAGAGCTGTTTTTCAGCTCTGTACGTGAGCpsBHQ1-3 или 5-FAM-GCTCA(oxoG)
GTACAGAGCTGTTTTTCAGCTCTGTACGTGAGCpsBHQ1-3 - представляющие собой
олигодезоксирибонуклеотиды, формирующие
шпильку и несущие FRET-пару FAM/BHQ1 на
концах цепи. Зонды также содержат в своем
составе повреждение, специфичное для
определяемого фермента. При этом для
предотвращения неспецифической 3-5-
экзонуклеазной деградации ДНК-зонда в
клеточном экстракте 3-концевую
межнуклеотидную фосфатную группу заменяют
на тиофосфатную. Технический результат
заключается в повышении точности и
достоверности результатов определения
активности ферментов репарации ДНК у
человека, расширении функциональных
возможностей известного способа, и применении
этого способа для анализа активности в клетках
человека. 4 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл., 5 пр