Трансгенные линии индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека ICGI022-A-6 И ICGI022-A-7 с доксициклин-управляемыми вариантами программируемой нуклеазы ASCAS12A Научная публикация
Журнал |
Онтогенез
ISSN: 0475-1450 |
||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
Вых. Данные | Год: 2023, Том: 54, Номер: 6, Страницы: 415-428 Страниц : 14 DOI: 10.31857/S047514502306006X | ||||||||
Ключевые слова | ИНДУЦИРОВАННЫЕ ПЛЮРИПОТЕНТНЫЕ СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ (ИПСК), ТРАНСГЕНЕЗ, СИСТЕМА CRISPR/CAS9, НУКЛЕАЗА ASCAS12A (ASCPF1), ИЗОГЕННЫЕ КЛЕТОЧНЫЕ ЛИНИИ | ||||||||
Авторы |
|
||||||||
Организации |
|
Реферат:
Редактирование геномов плюрипотентных стволовых клеток человека с применением программируемых нуклеаз позволяет создавать модели наследственных патологий с помощью направленного трансгенеза, нокаута генов и замены отдельных нуклеотидов в последовательностях ДНК. С использованием CRISPR/SpCas9-опосредованной гомологичной рекомбинации в локусе AAVS1 были получены клоны индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) человека ICGi022-A (Malakhova et al., 2020), которые несут трансгены двух вариантов нуклеазы AsCas12a (также известной как AsCpf1), распознающих разные консенсусы PAM (ICGi022-A-6 (AsCas12a, PAM 5'-TTTV-3') и ICGi022-A-7 (AsCas12a, PAM 5'-TYCV-3')), и трансген обратного доксициклин-зависимого трансактиватора M2rtTA. С помощью Вестерн-блот анализа было показано, что добавление в культуральную среду доксициклина вызывает активацию экспрессии белков AsCas12a(TTTV) и AsCas12a(TYCV). Полученные трансгенные клоны ИПСК были подвергнуты молекулярно-генетическому и цитогенетическому анализу. С помощью количественной ПЦР и иммуноцитохимического анализа было показано, что в них наблюдается высокий уровень экспрессии мРНК генов-маркеров плюрипотентных клеток – OCT4, NANOG и SOX2, а также специфичная экспрессия белков-маркеров – OCT4, SOX2, SSEA-4 и TRA-1-60. Кроме того, с помощью метода спонтанной дифференцировки ИПСК в эмбриоидных тельцах, было установлено, что трансгенные клоны могут давать производные всех трех примитивных зародышевых листков: эктодермы, мезодермы и энтодермы. Цитогенетический анализ показал, что трансгенные клоны ИПСК имеют нормальный кариотип 46,XX.
Библиографическая ссылка:
Павлова С.В.
, Валетдинова К.Р.
, Маланханова Т.Б.
, Поливцев Д.Е.
, Малахова А.А.
, Григорьева Е.В.
, Шевченко А.И.
, Закиян С.М.
, Медведев С.П.
Трансгенные линии индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека ICGI022-A-6 И ICGI022-A-7 с доксициклин-управляемыми вариантами программируемой нуклеазы ASCAS12A
Онтогенез. 2023. Т.54. №6. С.415-428. DOI: 10.31857/S047514502306006X РИНЦ
Трансгенные линии индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека ICGI022-A-6 И ICGI022-A-7 с доксициклин-управляемыми вариантами программируемой нуклеазы ASCAS12A
Онтогенез. 2023. Т.54. №6. С.415-428. DOI: 10.31857/S047514502306006X РИНЦ
Даты:
Опубликована в печати: | 18 окт. 2023 г. |
Идентификаторы БД:
РИНЦ | 55186555 |
OpenAlex | W4394957523 |
Цитирование в БД:
Пока нет цитирований